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葡萄糖檢測試劑盒(Folin-Wu 微板法)說明書

更新時間:2021-05-28點擊次數(shù):1853

             葡萄糖(Glucose, Dextrose,Glu)又稱玉米葡糖,簡稱葡糖,化學式 C6H12O6,分子量 180.16,是自然界分布*、最重要的一種單糖,屬于多羥基醛。用酶學方法測定葡萄糖是生化檢測中的常用方法,常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法,上述酶學法特點是: 1、靈敏度、準確度、精密度均高;2、使用溫和的反應條件;3、操作簡便;4、適用于自動分析儀,測定葡萄糖亦可通過鄰甲苯胺法、苯胺法、聯(lián)苯胺法等實現(xiàn)。

葡萄糖檢測試劑盒(Folin-Wu 微板法)檢測原理是葡萄糖在加熱的堿性環(huán)境中銅離子還原成氧化亞銅沉淀,后者使磷鉬酸還原成鉬藍,使溶液呈藍色,顏色深淺與葡萄糖含量成正比,其最高吸收峰為 420nm,利用酶標儀測定樣品和標準品的吸光度值,通過公式可以計算出樣品的葡萄糖含量,本試劑盒可用于人或動物的血清、血漿、腦脊液、細胞、組織、細胞培養(yǎng)基等樣本中的葡萄糖含量定量測定。本試劑盒僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成:

    

 

名稱

 

100T

Storage

試劑(A): Glu 標準儲存液(55mmol/L)

1ml

4℃

試劑(B): 蛋白酸化液

10ml

RT

試劑(C): 蛋白沉淀液

10ml

4℃

試劑(D): Folin 堿性銅溶液

10ml

RT

試劑(E): Wu 磷鉬酸溶液

10ml

4℃ 避 光

使用說明書

1 份

自備材料:

1、蒸餾水、PBS、生理鹽水

2、離心管、96 孔板

3、水浴鍋

4、酶標儀

操作步驟(僅供參考)

1、樣本處理:

①血清、血漿、腦脊液樣本:從待測樣本中分離出的血清或血漿不應有溶血,一般需要去除蛋白質(即為無蛋白血濾液)后再經(jīng)檢測。取抗凝血 0.1ml,加入 0.7ml 蒸餾水和 0.1ml 蛋白酸化液,混勻,緩慢加入 0.1ml 蛋白沉淀液,邊加邊搖勻,至出現(xiàn)暗紅色蛋白質沉淀,靜置 10min,3000g 離心 5min,取上清液即為無蛋白血濾液,4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②組織樣本:準確稱取適量組織樣本,按質量(g):生理鹽水或 PBS(ml)=1:9 的比例,加入生理鹽水或PBS,冰浴條件下手動或機械勻漿,2500~3000g 離心 10min,取上清待用。

③細胞樣本:

a、取適量的細胞(一般推薦>106 以上),1000g 離心 10min,棄上清,留取沉淀。b、用 PBS 或生理鹽水清洗 1~2 次,1000g 離心 10min,棄上清,留取沉淀。

c、加入 200~300μl  PBS 或生理鹽水勻漿,冰浴條件下超聲破碎細胞,功率 300W,每次 3~5s,間隔 30s,重復 3~5 次。亦可手動勻漿,制備好的勻漿液不可離心;亦可用 1~2% Triton X-100 冰浴 30~60min,制備好的裂解液不可離心。

2、制備 Glu 標準應用液0.55mmol/L:取 10ul Glu 標準儲存液(55mmol/L),補加蒸餾水或者無菌水 990ul,充分混勻即可。根據(jù)需用量,臨用前按比例配置,不宜久存。

3、Glu 加樣:按照下表設置空白管、標準管、測定管,溶液應按照順序依次加入,并注意避免產(chǎn)生氣泡,如果樣品中的 Glu 濃度過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。

 

加入試劑(μl)

空白管/孔

標準管/孔

測定管/孔

蒸餾水

300

200

200

Glu 標準應用液(0.55mmol/L)

-

100

-

無蛋白血濾液或其他待測樣本

-

-

100

Folin 堿性銅溶液

100

100

100

Wu 磷鉬酸溶液

100

100

100

 

充分混勻, 置于沸水浴煮沸 8min,取出,在冷水中冷卻,注意不能搖動,靜置 10min, 分別加入 750μl 蒸餾水。

4、Glu 測定:取 200μl 上述溶液,加入 96 孔板中,以空白孔調零,用酶標儀在 420nm 處讀取標準孔和測定孔的吸光度。

 

計算:葡萄糖含量(mmol/L)=(測定管吸光度/標準管吸光度)×0.55×10

=(測定管吸光度/標準管吸光度)×5.5 其中 10 為去蛋白樣品的稀釋倍數(shù)

注意事項:

1、 待測樣本如不能及時測定,應置于 2~8℃保存,3 天內穩(wěn)定。

2、 上述低溫試劑避免反復凍融,以免失效或效率下降。

3、 Glu 標準應用液臨用前按比例配置,不宜久存。

4、 如樣品吸光度值偏大,則需再次稀釋后重新檢測。

5、 樣品中含有蛋白等干擾物質時,須用去蛋白的方法處理后再行檢測。

6、 煮沸時不能動搖。

 

有效期: 6 個月有效。4℃運輸,4℃保存。